Окраска по грамму как делать

woman 97088 1920 Советы на день
Содержание
  1. Основа для окраски по Граму, материалы, техника и использование
  2. фундамент
  3. материалы
  4. Приготовление красителей и реагентов
  5. Кристаллический фиолетовый раствор
  6. Решение А:
  7. Решение Б:
  8. Йод-Люголя
  9. обесцвечивание
  10. контрастировать
  11. Сафраниновый маточный раствор
  12. Хранение реагентов
  13. Подготовка пробы к окраске
  14. -Грамм прямых образцов
  15. Грамм мочи без центрифуги
  16. LCR Gram
  17. Грамм дыхательных проб
  18. Табурет Грам
  19. -Граммовые культуры
  20. Жидкие культуры
  21. Твердые культуры
  22. техника
  23. утилита
  24. Распространенные ошибки
  25. Отбеливатель чрезмерно
  26. Не ждите достаточно времени для сушки, чтобы добавить иммерсионное масло:
  27. Обратный порядок реагентов:
  28. Используйте старые культуры (твердые или жидкие):
  29. Используйте очень старый раствор Люголя:
  30. Голубоватый фон
  31. Микробиология. Окраска по Граму: красители, проведение, результаты
  32. Особенности окраски
  33. Окрасы
  34. Подготовка материала
  35. Окрашивание
  36. Результаты
  37. Применение
  38. Окрашивание по Граму
  39. Содержание
  40. Использование в диагностике
  41. Техника проведения окраски
  42. Подготовка материала для окраски
  43. Фиксация
  44. Физический способ фиксации
  45. Химический способ фиксации
  46. Процесс окрашивания мазков
  47. Техника окраски бактерий в гистологических срезах по Граму-Вейгерту
  48. См. также
  49. Ссылки
  50. На немецком языке
  51. На английском языке
  52. Полезное
  53. Смотреть что такое «Окрашивание по Граму» в других словарях:

Основа для окраски по Граму, материалы, техника и использование

Грамное пятно это самый простой и полезный метод окрашивания в диагностической микробиологии. Этот метод был создан датским доктором Гансом Кристианом Грамом в 1884 году, которому удалось классифицировать бактерии по грамположительным и грамотрицательным по составу клеточной стенки..

Метод подвергся определенным модификациям Хакера в 1921 году для стабилизации реагентов и улучшения качества окраски, так что окраска Грамма также известна как Грам-Хакер..

tincin de gram fundamento materiales tcnica y usos

С помощью этой методики также можно наблюдать форму, которую имеют микроорганизмы, то есть, среди прочего, являются ли они кокки, бациллы, коккобациллы, плеоморфные, нитевидные. А также его распределение в пространстве: в кластере, в цепочке, изолированно, в парах, в тетрадах и т. Д..

При подозрении на бактериальную инфекцию большую часть полученных образцов следует распределить на предметном стекле и окрашивать по Граму для исследования под микроскопом..

Отчет Грамма поможет врачу определить, какой тип микроорганизма может быть причиной инфекции, до получения окончательного результата урожая..

В некоторых случаях жизнь пациента сильно нарушена, поэтому врачам срочно нужен отчет Грамма, чтобы провести эмпирическое лечение, ожидая выявления микроорганизма..

Например, если Грамм обнаруживает, что в спинномозговой жидкости есть грамположительные кокки, врач проведет первоначальную терапию антибиотиками, которые уничтожают этот тип бактерий, в соответствии с протоколами, установленными для него..

Как только будет получен окончательный результат с названием изолированного микроорганизма и соответствующей антибиограммой, врач оценит, стоит ли менять терапию. Это решение будет принято в соответствии с изучением чувствительности микроорганизма к принимаемым им антибиотикам и эволюции пациента..

фундамент

Это техника, которая представляет 4 основных этапа: окрашивание, фиксация с помощью протравы, изменение цвета и сглаживание. Поэтому этот метод помимо окрашивания бактерий, также отличает их.

Грамположительные бактерии, имеющие толстую стенку пептидогликана, образуют больше комплексов (кристаллический фиолетовый-йод), поэтому они сохраняют краситель.

Это также влияет на то, что стенка грамположительных бактерий содержит большее количество ненасыщенных кислот, которые проявляют высокое сродство к окислителям (люгол).

Между тем, грамотрицательные бактерии имеют тонкий слой пептидогликана, что делает бактерии менее сложными, чем грамположительные бактерии..

Затем наступает этап обесцвечивания, когда грамположительные и грамотрицательные бактерии ведут себя по-разному..

Грамотрицательные бактерии содержат внешнюю мембрану, богатую липополисахаридами, которая является частью ее клеточной стенки. Жиры разрушаются при контакте с ацетоном спирта, поэтому дестабилизируется внешняя мембрана, выделяется фиолетовый кристалл.

Вот как это затем контрастирует с сафранином или основным фуксином, принимая красный цвет.

В случае грамположительных бактерий они сопротивляются обесцвечиванию, потому что отбеливатель действует, чтобы закрыть поры, что препятствует выходу кристаллического фиолетового / йодного комплекса.

Поэтому окраска с фиолетовым кристаллом стабильна, и нет места для сафранина или фуксина. Из-за этого эти бактерии окрашивают интенсивный синий или фиолетовый.

материалы

Раскраска Грамм состоит из:

Приготовление красителей и реагентов

Кристаллический фиолетовый раствор

Решение А:

Решение Б:

Для окончательного приготовления фиолетового кристалла раствор 1:10 следует разбавить дистиллированной водой и смешать с 4 частями раствора B. Перед использованием смесь хранится в течение 24 часов. Фильтруют в колбу для окрашивания янтаря с помощью бумажного фильтра..

Количество, которое будет использоваться ежедневно, переносится в янтарную бутылку с капельницей.

Йод-Люголя

Взвесьте и измерьте указанное количество каждого соединения следующим образом:

Йодид калия постепенно растворяется в воде, а затем добавляется йод. Раствор побрился в бутылку янтарного цвета.

Количество, которое будет использоваться ежедневно, переносится в меньшую янтарную бутылку с капельницей.

обесцвечивание

Он готовится в равных частях. Накройте хорошо, это имеет тенденцию испаряться.

Поместите в бутылку с капельницей.

Этот препарат обеспечивает обесцвечивание в умеренное время 5-10 секунд и является наиболее рекомендуемым.

Новички предпочитают использовать только 95% этиловый спирт, где обесцвечивание происходит медленнее, от 10 до 30 секунд..

В то время как самые опытные могут использовать чистый ацетон, где изменение цвета происходит очень быстро от 1 до 5 секунд.

контрастировать

Сафраниновый маточный раствор

После взвешивания указанное количество сафранина растворяется в 100 см 3 этилового спирта до 95%..

Рабочий раствор сафранина готовят из исходного раствора..

Для этого отмерьте 10 см 3 исходного раствора, добавьте 90 см 3 дистиллированной воды до 100 мл..

Рекомендуется перевести количество, которое будет использоваться ежедневно, в янтарную бутылку с капельницей.

Микроорганизмы, которые слабо окрашивают по Граму-Гекеру, например, некоторые анаэробы, Legionella sp., Campylobacter sp. И Brucella sp., они могут быть намного лучше окрашены, если используется модификация, сделанная Kopeloff для окрашивания по Граму-Хакеру, называемая окраской по Граму-Копелу..

Этот метод заменяет краситель сафранина на основной фуксин. С этой модификацией возможно эффективно окрашивать вышеупомянутые микроорганизмы.

Хранение реагентов

Подготовленные красители следует хранить при комнатной температуре.

Подготовка пробы к окраске

Образец должен содержать не менее 10 5 микроорганизмы перед наблюдением микроорганизмов в мазке, скорее всего. Спреды могут быть сделаны из прямого образца или культур в твердой или жидкой среде..

Спрэды должны быть равномерными, хорошо распределенными и не слишком толстыми для лучшей визуализации имеющихся структур.

-Грамм прямых образцов

Грамм мочи без центрифуги

Мочу смешивают и 10 мкл помещают на предметное стекло. Наблюдение, по крайней мере, одного поля бактерий / иммерсии указывает на наличие инфекции.

Это означает, что культура будет иметь приблизительно более 100 000 КОЕ / мл (10 5 КОЕ / мл) мочи в 85% случаев.

Этот метод бесполезен при количестве колоний ниже 100 000 КОЕ.

LCR Gram

CSF должен быть центрифугирован, супернатант удален, а осадок распределен на предметном стекле. Эта жидкость стерильна при нормальных условиях; наблюдение бактерий указывает на инфекцию.

Грамм дыхательных проб

Грамм мокроты, бронхиальный или бронхоальвеолярный лаваж, хотя могут присутствовать различные микроорганизмы, всегда будут помогать в диагностике, помимо того, что они полезны, тип наблюдаемых клеток.

В случае мокроты, мазок должен быть подготовлен с наиболее гнойными частями образца.

Табурет Грам

Не рекомендуется выполнять грамму для этого типа образцов, так как он не имеет диагностического значения.

-Граммовые культуры

Их можно сделать двумя способами: один из жидких культур, а другой из твердых культур..

Жидкие культуры

Из жидких культур это чрезвычайно просто; под зажигалку берут несколько жареных мутных бульонов и помещают их на чистое и сухое предметное стекло, совершая круговые движения от центра к периферии, чтобы равномерно распределить материал.

Допускается самопроизвольное высыхание на воздухе. После высыхания материал фиксируется на листе при нагревании. Для этого с помощью зажима лист 3 4 раза пропускают через пламя горелки Бунзена, стараясь не обжечь материал..

Листу дают остыть и помещают на окрашивающий мост.

Твердые культуры

Чтобы выполнить продление для окрашивания по Граму из твердой культуры, выполните следующие действия:

Прежде чем выбрать колонии для взятия, следует подготовить предметное стекло, поместив примерно две капли стерильного физиологического солевого раствора..

Если исходная культуральная пластина содержит несколько разных типов колоний, для выполнения грамма будет выбрана отдельная колония каждой из них. Каждая колония будет взята с платиновой петлей, чтобы растворить ее в физиологическом растворе, предварительно помещенном на предметное стекло..

Круговые движения даны от центра к периферии, чтобы равномерно распределить колонию на предметном стекле..

Допускается самопроизвольное высыхание на воздухе. После высыхания лист фиксируется нагреванием, как объяснено выше (зажигание предметного стекла зажигалкой), стараясь не обжечь материал..

Эта процедура должна быть выполнена с каждым другим типом колонии. На листе бумаги следует отметить порядок наблюдения, например:

Колония 1: желтая бета-гемолитическая колония: грамположительные кокки наблюдались в кластерах

Колония 2: Кремовая колония, без гемолиза: грамотрицательных коккобацилл не наблюдалось..

Каждый лист должен быть помечен, чтобы знать, что мы наблюдаем.

техника

Методика окрашивания по Граму чрезвычайно проста в исполнении и относительно недорога и не может быть пропущена в лаборатории микробиологии.

То же самое делается следующим образом:

После высыхания поместите 1 каплю иммерсионного масла, чтобы увидеть его под объективом 100X в оптическом микроскопе..

утилита

Эта методика позволяет различать морфотипические различия большинства бактерий..

Дрожжи также отличаются этим цветом. Они берут кристалл фиолетовый, то есть окрашивают грамположительный.

С другой стороны, можно выделить грамположительные спорообразующие бациллы, в которых внутри бацилл наблюдается свободное пространство, где сформировалась эндоспора, хотя споры плохо окрашиваются. Чтобы использовать споры, используются другие методы, такие как Шеффер-Фултон.

Следует отметить, что это пятно не служит для окрашивания всех видов бактерий, то есть есть случаи, когда окрашивание не работает.

В этом случае можно упомянуть бактерии, лишенные клеточной стенки. Например: род Mycoplasma, сферопласты, уреаплазмы, L-формы и протопласты.

Он также плохо окрашивает бактерии со стенками, богатыми миколиновыми кислотами, такими как микобактерии, и внутриклеточными бактериями, такими как хламидии и риккетсии..

Также неэффективно окрашивать большинство спирохетальных бактерий..

Есть бактерии того же рода, которые можно наблюдать в том же образце, что и грамположительные и грамотрицательные. Когда это происходит, это называется переменным окрашиванием по Граму, что может быть связано с изменением питательных веществ, температуры, pH или концентрации электролитов..

Распространенные ошибки

Отбеливатель чрезмерно

Преувеличивание на этапе обесцвечивания может привести к наблюдению ложных грамотрицательных микроорганизмов.

Не ждите достаточно времени для сушки, чтобы добавить иммерсионное масло:

Эта ошибка вызывает образование жировых мицелл, которые затрудняют наблюдение за присутствующими структурами. Это происходит, когда масло соединяется с молекулами воды, присутствующими в мазке..

Обратный порядок реагентов:

Ошибка, подобная этой, приведет к тому, что грамотрицательные бактерии станут фиолетовыми, то есть ложными..

Используйте старые культуры (твердые или жидкие):

Это может привести к тому, что грамположительные бактерии окрашивают грамотрицательные (ложно грамотрицательные). Это происходит потому, что в старых культурах вероятно, что есть мертвые или испорченные бактерии, и в этих условиях бактерии не сохраняют фиолетовый кристалл..

Используйте очень старый раствор Люголя:

Со временем люголь теряет свои свойства, а цвет исчезает. Если используется уже дегенерированный реагент, он не будет хорошо фиксировать кристаллический фиолетовый, поэтому существует возможность получения визуализации микроорганизмов, ложно грамотрицательных.

Голубоватый фон

Правильно обесцвеченный фон будет красным. Синий фон указывает на то, что изменение цвета было недостаточным.

Источник

Микробиология. Окраска по Граму: красители, проведение, результаты

В микробиологии окраска по Граму имеет большое значение. Ее применяют для диагностики инфекционных заболеваний, выявления патогенности бактерий. Метод позволяет определить сходные по форме и размеру бактерии, которые относятся к различным видам и родам.

Особенности окраски

Окраска бактерий по Граму – сложный метод, в котором применяют два вида окраса: основной и дополнительный. В процессе выполнения манипуляции применяют обесцвечивающие вещества, к которым относятся спирты и кислоты.

366b0ec3c90d49b0f4f1771b60341902 Вам будет интересно: Какая у вас степень владения языком?

В микробиологии окраску по Граму проводят трифенилметановой группой красителей. К ней относятся генциановые, метиловый синий, кристаллвиолет. Разные виды бактерий дают разные окрасы, образуя прочные соединения с красителями.

ca612e24a0de04540ae36cd20f454380

Окрасы

В микробиологии окраска по Граму бывает двух видов: грамположительная и грамотрицательная. В первом случае микроорганизмы дают прочные соединения с красителями и йодом. Во время анализа они не обесцвечиваются при воздействии со спиртом, из-за чего не изменяют своего первоначального фиолетового оттенка.

Грамотрицательные окрасы образуются при воздействии с йодом и легко разрушаются под действием йода. В результате микробы обесцвечиваются, а затем приобретают красный оттенок.

Подготовка материала

По правилам микробиологии, окраска по Граму требует предварительной подготовки материалов. Его необходимо распределить тонким слоем по поверхности стекла. Затем мазок подсушивают и после полного высыхания фиксируют. При этом мазок закрепляется на стекле, что позволяет исключить смывание бактерий красителями. К тому же мертвые микроорганизмы окрашиваются лучше, чем живые.

После подготовки материала подбирают метод окрашивания: физический или химический. Первый предполагает воздействие высокой температуры на микробную клетку. Во время химического способа применяют различные химические вещества, которые вызывают коагуляцию протеинов цитоплазмы.

Подготавливают набор для окраски по Граму, предметные стекла с бактериями. Их берут пинцетом или аккуратно пальцами за ребра мазком вверх, затем проводят пару раз над верхом пламени горелки. Процесс должен занимать пару секунд.

Процесс фиксации химическим методом предполагает использование ацетона, спирта, специальных смесей, жидкость Карнуа. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в фиксирующее вещество на пятнадцать минут, затем просушивают на воздухе.

6f99c2addf710b543e7d59f76d9c32f1

Окрашивание

Окраска мазков по Граму проводится по определенному алгоритму.

Чтобы определить, есть ли в мазке грамотрицательные бактерии, проводят дополнительно окрашивание фуксином или сафранином. Препараты наносят на две минуты. В конце процедуры стекло промывают, высушивают.

cb0dcb5ab3133b9e346e24fc774dbf1e

Результаты

Все грамположительные микроорганизмы окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, а грамотрицательные – в красный. Шарообразные формы обычно относятся к грамположительным видам, а извитые формы – отрицательно окрашиваются. Палочковидные бактерии могут быть грамотрицательными и грамположительными.

Чтобы получить максимально достоверные результаты исследований, рекомендуется применять суточные культуры, а также свежеприготовленные растворы для окрашивания.

Механизм окраски позволяет увидеть и оценить физико-химические особенности строения цитоплазмы, клеточные стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. У первых содержится много рибонуклеиновой кислоты, белков в цитоплазме, а в клеточных стенках – пептидогликана. Из-за этого во время обработки мазков генцианвиолетом и Люголем у грамположительных видов бактерий образуется прочное соединение ионов йода и красителя.

При обработке спиртами грамположительные микроорганизмы удерживают краситель, а грамотрицательные – обесцвечиваются и окрашиваются дополнительно разведенным фуксином в красный оттенок. Некоторые бактерии способны окрашиваться только на стадии роста.

e32a0df9390c2bf99bf7954c5a335e74

Применение

Окраску по Граму проводят при анализе вида микроорганизмов в мазках из влагалища и слюны. Этот способ позволяет определить вид микроорганизмов в кале, в плевральной, перитонеальной жидкости и не только. Любые жидкости, где могут содержаться бактерии, исследуют данным методом. После проведения окрашивания врачи подбирают метод лечения, назначая препараты, способные воздействовать на грамположительные или грамотрицательные бактерии.

Источник

Окрашивание по Граму

Метод Грама — метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом.

По Граму бактерии окрашивают осно́вными красителями — генциановым или метиловым фиолетовым и др., затем краситель фиксируют раствором йода. При последующем промывании окрашенного препарата спиртом те виды бактерий, которые оказываются прочно окрашенными, называют грамположительными бактериями (обозначаются Грам (+)), — в отличие от грамотрицательных (Грам (−)), которые при промывке обесцвечиваются.

Содержание

Использование в диагностике

Окраска по Граму имеет большое значение в систематике бактерий, а также для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.

Грамположительны кокковые и спороносные формы бактерий, а также дрожжей, они окрашиваются в иссиня-чёрный (тёмно-синий) цвет.

Грамотрицательны многие неспороносные бактерии, они окрашиваются в красный цвет, ядра клеток приобретают ярко-красный цвет, цитоплазма — розовый.

Техника проведения окраски

Окраска по Граму относится к сложному способу окраски, когда на мазок воздействуют двумя красителями, из которых один является основны́м, а другой — дополнительным. Кроме красящих веществ при сложных способах окраски применяют обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и др.

Для окраски по Граму чаще используют красители трифенилметановой группы: генциановый, метиловый фиолетовый или кристаллвиолет. Грамположительные Грам (+) микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и йодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином Грам (+) микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.

Грамотрицательные Грам (−) микроорганизмы образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, и затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.

Подготовка материала для окраски

Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности хорошо обезжиренного предметного стекла. Приготовленный мазок высушивают на воздухе и после полного высыхания фиксируют. Гистологические срезы готовят по рутинной методике, фиксируя кусочки тканей в формалине и заливая в парафин.

Фиксация

При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.

Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение химических средств, вызывающих коагуляцию белков цитоплазмы.

Физический способ фиксации

Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за рёбра мазком кверху и плавным движением проводят 2—3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с.

Надёжность фиксации проверяют следующим приёмом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога (70—80 °С).

Химический способ фиксации

Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова (смесь этилового спирта 96 % и наркозного эфира в соотношении 1:1), жидкость Карнуа (этилового спирта 96 % — 60 %, хлороформа 30 %, ледяной уксусной кислоты 10 %). Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10—15 минут и затем высушивают на воздухе.

Процесс окрашивания мазков

Техника окраски бактерий в гистологических срезах по Граму-Вейгерту

Результат: грамположительные бактерии сине-черные, фибрин фиолетовый, ядра красные.

См. также

Ссылки

На немецком языке

На английском языке

Полезное

Смотреть что такое «Окрашивание по Граму» в других словарях:

окрашивание по Граму — Метод окрашивания микробиологических препаратов, разработанный Хансом Грамом (1853 1938, Дания) и позволяющий идентифицировать две группы бактерий грам положительные и грам отрицательные; различия в окраске обусловлены особенностями… … Справочник технического переводчика

окрашивание по Граму — Gram stain окрашивание по Граму. Метод окрашивания микробиологических препаратов, разработанный Хансом Грамом (1853 1938, Дания) и позволяющий идентифицировать две группы бактерий грам положительные и грам… … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.

ОКРАШИВАНИЕ ПО ГРАМУ — (Grams stain) метод окрашивания бактериальных клеток, применяемый для их первичной идентификации. Тонкий слой, содержащий бактерии; наносится на предметное стекло, высушивается и фиксируется воздействием тепла; затем окрашивается фиолетовым… … Толковый словарь по медицине

Окрашивание По Граму (Gram’S Stain) — метод окрашивания бактериальных клеток, применяемый для их первичной идентификации. Тонкий слой, содержащий бактерии; наносится на предметное стекло, высушивается и фиксируется воздействием тепла; затем окрашивается фиолетовым красителем,… … Медицинские термины

Окрашивание микробов — Окраска микроорганизмов (крашение микробов) комплекс методов и приемов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в… … Википедия

Грамотрицательные бактерии — Фотография сделанная трансмиссионым электронным микроскопом. Клеточные покровы цианобактерии Phormidium uncinatum. Клеточные покровы (CW) состоит из, цитоплазматической мембраны (CM), пептидогл … Википедия

БАКТЕРИИ — обширная группа одноклеточных микроорганизмов, характеризующихся отсутствием окруженного оболочкой клеточного ядра. Вместе с тем генетический материал бактерии (дезоксирибонуклеиновая кислота, или ДНК) занимает в клетке вполне определенное место… … Энциклопедия Кольера

Gram stain — Gram stain. См. окрашивание по Граму. (Источник: «Англо русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд во ВНИРО, 1995 г.) … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.

ТУБЕРКУЛЕЗ — ТУБЕРКУЛЕЗ. Содержание: I. Исторический очерк. 9 II. Возбудитель туберкулеза. 18 III. Патологическая анатомия. 34 IV. Статистика. 55 V. Социальное значение туберкулеза. 63 VІ.… … Большая медицинская энциклопедия

ОКРАСКА — (микроорганизмов). Мазок на предметном или покровном стекле высушивается на воздухе; высушивание над пламенем не рекомендуется, допускается лишь помещение препарата вблизи пламени. Высушенный препарат фиксируется троекратным проведением через… … Большая медицинская энциклопедия

Источник

Оцените статью
Добавить комментарий

Adblock
detector